Streptavidin

Le Streptavidin est 60.000 une protéine tetrameric de Dalton épurée de l'avidinii de streptomyces de de la bactérie . Il trouve l'utilisation large dans la biologie moléculaire par son affinité extraordinairement forte pour la biotine de vitamine ; la dissociation constant (K_d) de du complexe de biotine-streptavidin est sur l'ordre de mole/l de ~10^-15, se rangeant parmi une des interactions non-covalentes connues les plus fortes.

Utilisations en biotechnologie

Parmi les utilisations les plus communes sont la purification ou la détection de divers biomolécules. Le lien fort de streptavidin-biotine peut être employé pour attacher de divers biomolécules à un des autres ou sur un appui plein.

Une technique fixe l'ADN par la première ADN de digestion avec un exonuclease de restriction pour produire un extrémité franche, un surplomb des 3 ' surplomb ou 5 '. L'ADN est alors incubée avec biotin-11-dUTP, un analogue de deoxyribonucleotide qui est en covalence attaché à la biotine, et le fragment de Klenow de l'ADN polymérase De Holoenzyme I du Escherichia coli . Le biotin-11-dUTP est incorporé aux 3 ' extrémité de la rive complémentaire aux 5 ' parties de ssDNA du surplomb. C'est parce que les ADN polymérases De peuvent seulement ajouter des nucléotides aux 3 ' - l'OH de l'ADN et pas des 5 ' - phosphate.
U -3 DE DU

5 ' - ACTGGCT '
3 ' - TGACCGAACCGTT-5

(où le U de est biotin-11-UTP incorporé à la rive d'ADN)

Supposant que le soin est pris pour s'assurer que seulement le ' surplomb un 5 avec seulement un emplacement possible est disponible pour l'incorporation de dUTP, le résultat est une rive de l'ADN avec une extrémité biotinylated. Une des utilisations primaires pour l'ADN biotinylated est pour lier (par l'intermédiaire des interactions non-covalentes) sur les surfaces enduites par streptavidin. L'ADN fermement étant attaché à ce substrat, la diverse hybridation d'ADN et les analyses immunologiques peuvent être exécutées. Elles peuvent également être attachées aux microsphères de l'agarose enduites par streptavidin, au polystyrène ou même aux perles paramagnétiques du . Ces complexes sont les plus utilisés généralement pour la purification ou l'isolement des protéines obligatoires d'ADN. D'autres techniques biologiques moléculaires tiennent compte du contrôle exquis de l'ordre d'ADN, de la longueur, etc. qui font à ceci un outil moléculaire très puissant.

Comparaison à l'avidine

Il y a des différences considérables dans la composition de l'avidine et du streptavidin, mais elles sont remarquablement semblables à d'autres égards. Les deux protéines forment les complexes Tetrameric du pour fonctionner dans ce que chaque sous-unité peut lier une molécule de biotine. Le chlorhydrate de la guanidine dissociera des tétramères d'avidine et de streptavidin dans leurs sous-unités composantes, mais le streptavidin est plus résistant à la dissociation .

Streptavidin est beaucoup moins soluble dans l'eau que l'avidine, et il manque du étendu Glycosylation de l'avidine. Streptavidin a un point isoélectrique (pi) de modérément acide de ~5. Une forme de recombinaison du de streptavidin avec une masse de 53.000 daltons et de pi proche-neutre est également disponible dans le commerce. Puisque le streptavidin manque de n'importe quelle modification de l'hydrate de carbone et a pi proche-neutre, il a l'avantage de l'obligatoire non spécifique beaucoup inférieur que l'avidine. L'avidine déglycosylée est plus comparable à la taille, au pi et à l'attache non spécifique du streptavidin.

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