Souillure

cet article est au sujet de teindre la matière organique dans le laboratoire. Pour le traitement en bois, voir le bois de souiller .

Le souillant est une technique biochimique du d'ajouter un classe-spécifique (ADN , colorant de d'hydrates de carbone de lipides de protéines à un substrat pour qualifier ou mesurer la présence d'un composé spécifique. Il est semblable au de étiquetage fluorescent

Le souille et les colorants sont fréquemment employés dans la biologie et la médecine pour accentuer des structures dans les tissus biologiques pour le visionnement, souvent à l'aide de différentes taches des microscopes peut être employée pour définir et examiner les tissus en bloc (accentuant, par exemple, fibres musculaires ou tissu conjonctif ), les populations des cellules (classifiant différents globules sanguins par exemple), ou les organelles dans différentes cellules.

La souillure biologique est également employée pour marquer des cellules dans l'écoulement cytometry de , et pour marquer les protéines ou les acides nucléiques dans l'électrophorèse de gel de .

In vitro souillant

La souillure in vitro du implique les cellules ou les structures de coloration qui ne vivent plus. Certaines taches sont souvent d'indiquer plus de détails et de dispositifs que seule une tache simple. Combiné avec des protocoles spécifiques pour la fixation et la préparation témoin, les scientifiques et les médecins peuvent employer ces techniques standard en tant qu'outils diagnostiques conformés et qu'on peut répéter. Un Counterstain est une tache qui rend des cellules ou des structures plus évidentes, si pas complètement évident avec la tache principale. Par exemple, la violette en cristal souille seulement les bactéries grampositives du en gramme de souillant . Un counterstain de Safranin est appliqué qui souille toutes les cellules, permettant l'identification des bactéries gramnégatives aussi bien.

Préparation

Les étapes préparatoires impliquées dépendent du type d'analyse prévu ; certains ou toutes les procédures suivantes peuvent être exigés.

Le Permeabilization implique le traitement des cellules (habituellement) de l'agent tensio-actif doux . Ce traitement dissoudra les membranes de cellules de et permettra un plus grand accès de molécules de teinture à l'intérieur des cellules.

&ndash de la fixation de de ; ce qui peut soi-même se composer plusieurs du steps&ndash ; les objectifs pour préserver la forme des cellules ou le tissu ont impliqué autant que possible. Chauffer parfois est employé pour tuer, adhérer, et changer le spécimen ainsi il acceptera des taches. La plupart des fixatifs chimiques (produits chimiques causant la fixation) produisent des liaisons chimiques entre les protéines et d'autres substances dans l'échantillon, augmentant leur rigidité. Le fixatif commun incluent le formaldéhyde , l'éthanol , le méthanol , et/ou l'acide picrique . Des morceaux de tissu peuvent être inclus en cire de la paraffine pour augmenter leur force et stabilité mécaniques et pour les faciliter pour couper en tranches minces.

Le support implique habituellement d'attacher les échantillons à une glissière en verre de microscope pour l'observation et l'analyse. Dans certains cas, des cellules peuvent être développées directement sur une glissière. Pour des échantillons de cellules lâches (comme avec une souillure ou une souillure de PAP de sang) l'échantillon peut être directement appliqué à une glissière. Pour de plus grands morceaux de tissu, des sections minces (tranches) sont faites using un microtome ; ces tranches peuvent alors être montées et inspectées.

Souillure

À son plus simple, le processus de souillure réel peut impliquer d'immerger l'échantillon (avant ou après la fixation et le montage) dans la solution de colorant, suivie du rinicage et de l'observation. Beaucoup de colorants, cependant, exigent l'utilisation d'un mordant : un composé chimique qui réagit avec la tache pour former un précipité insoluble et coloré . Quand la solution excessive de colorant est enlevée, la tache mordancée reste.

Souillure négative

Une méthode de souillure simple pour des bactéries qui est habituellement réussie même lorsque le " ; staining" positif ; les méthodes détaillées au-dessous de l'échouer, est d'utiliser une tache négative . Ceci peut être réalisé simplement en enduisant l'échantillon dessus à la glissière, suivie d'une application de Nigrosin (encre de Chine). Après séchage, les micro-organismes peuvent être regardés dans la microscopie lumineuse de champ en tant qu'inclusions plus légères bien-contrastées contre l'environnement foncé les entourant. Note : la souillure négative est une technique douce qui peut ne pas détruire les micro-organismes donc qu'elle est peu convenable pour étudier des microbes pathogènes.

Souillure de gramme

Le gramme de souillant est employé pour déterminer le statut de gramme pour classifier des bactéries largement. Il est basé sur la composition de leur paroi cellulaire . Gramme souillant la violette en cristal d'utilisations pour souiller les murs du cellule, l'iode comme mordant, et un Fuchsin ou counterstain de Safranin pour marquer toutes les bactéries. Le statut de gramme est important dans la médecine ; la présence ou l'absence d'une paroi cellulaire changera la susceptibilité de la bactérie à quelques antibiotiques

Les bactéries grampositives du souillent bleu-foncé ou violet. Leur paroi cellulaire est typiquement < ! -- mais pas toujours ! ! --> les riches avec le Peptidoglycan et manquent de la couche secondaire de Lipopolysaccharide de membrane et de trouvée dans les bactéries gramnégatives.

Sur la plupart des préparations Gramme-souillées, les organizations gramnégatives du sembleront rouges ou roses parce qu'elles counterstained ; en raison de la présence d'un contenu plus élevé de lipide, après alcool-traitement, la porosité de la paroi cellulaire augmente et par conséquent le complexe CVI (violette en cristal - iode) peut passer à travers. Ainsi, la tache primaire n'est pas maintenue. En outre, contrairement à la plupart des bactéries grampositives, les bactéries gramnégatives ont seulement quelques couches de peptidoglycan et une membrane de cellules secondaires faite principalement en lipopolysaccharide.

Haematoxylin et éosine (souillure de H&E)

Le Haematoxylin et l'éosine souillant le protocole de est employé fréquemment en histologie pour examiner les sections minces du tissu. Le Haematoxylin souille le bleu de noyaux de cellules, alors que l'éosine souille le cytoplasme, le tissu conjonctif et d'autres substances extracellulaires rose ou rouge. L'éosine est fortement absorbée par la coloration des globules rouges ils rouge lumineux.

Souillure de Papanicolaou

Le Papanicolaou souillant ou PAP souillant, est une méthode fréquemment utilisée pour examiner des échantillons de cellules provenant de diverses sécrétions corporelles. Il est fréquemment employé pour souiller les spécimens de la souillure de PAP . Il emploie une combinaison de Haematoxylin , de G orange , d'éosine Y , de SF vert clair jaunâtre, et parfois de Bismarck Brown Y .

Souillure de PAS

La souillure périodique d'acide-Schiff est employée pour marquer les hydrates de carbone (glycogène , glycoprotéine , Proteoglycans de de . Elle est employée pour distinguer différents types de maladies de stockage de glycogène.

Masson trichrome

Le trichrome de Masson de est (car le nom implique) un protocole de souillure three-colour. La recette a évolué de la technique originale de Masson pour différentes applications spécifiques, mais toute est bien adaptée pour distinguer des cellules du tissu conjonctif environnant. La plupart des recettes produiront la kératine rouge et les fibres musculaires, souillure bleue ou verte du collagène et l'os , souillure rouge-clair ou rose du cytoplasme , et les noyaux noirs de cellules de .

Taches de Romanowsky

Les taches tout de Romanowsky de sont basées sur une combinaison d'eosinate (chimiquement éosine de réduite par ) et de bleu de méthylène (parfois avec son azur A de produits d'oxydation et azur B ). Les variantes communes incluent la tache de Wright de , la tache de Jenner de , la tache de Leishman de et la tache de Giemsa de .

Tous sont employés pour examiner le sang ou les échantillons de la moelle . Ils sont preferred au-dessus de H&E pour l'inspection des globules sanguins parce que les différents types de leucocytes (globules sanguins de blancs) peuvent être aisément distingués. Tous sont également adaptés à l'examen du sang pour détecter les parasites sang-soutenus comme la malaria .

Argent de souillant

L'argent de souillant est l'utilisation de l'argent de souiller les sections histologiques que ce genre de souillure est important particulièrement pour montrer les protéines (par exemple type collagène de d'III) et l'ADN . On l'emploie pour montrer que des substances intérieures et la souillure argentée extérieure des cellules est également employées dans l'électrophorèse de gel de gradient de température de .

Quelques cellules sont l'argentaffin de . Ces le ramènent la solution argentée de à l'argent métallique après la fixation de la formaline . Cette méthode a été découverte par le italien Camillo Golgi , en employant une réaction entre le nitrate d'argent et le dichromate de potassium , de ce fait précipitant le chromate d'argent en quelques cellules (voir la méthode de Golgi de ). D'autres cellules sont le argyrophilic. Celles-ci ramènent la solution argentée à l'argent métallique après avoir été exposé à la tache qui contient un reductant, par exemple l'hydroquinone ou la formaline.

Souillure du Soudan

Le Soudan souillant est l'utilisation des colorants du Soudan de souiller les substances sudanophilic, habituellement Soudan III , Soudan IV , l'huile O rouge des lipides de , et le Soudan B noir sont employé souvent. La souillure du Soudan est employée souvent pour déterminer le niveau de la graisse fécale pour diagnostiquer le Steatorrhea .

Souillure in vivo du

La souillure in vivo du est le processus de teindre le tissues&mdash vivant ; dans le vivo signifie le " ; dans le life" ; (rivaliser avec le in vitro souillant). En faisant prendre de certaines cellules ou structures des couleurs contrasting, leur forme (morphologie) ou position dans une cellule ou un tissu peut être aisément vue et étudiée. Le but habituel est d'indiquer les détails cytologiques qui ne pourraient pas autrement être évidents ; cependant, la souillure peut également indiquer où certains produits chimiques ou réactions chimiques spécifiques ont lieu dans des cellules ou des tissus.

Souvent ces taches s'appellent les taches essentielles. Elles sont présentées à l'organization tandis que les cellules vivent toujours. Cependant, ces taches sont par la suite le toxique à l'organization, encore plus ainsi que d'autres. Pour réaliser a désiré des effets, les taches sont employées dans les solutions très diluées s'étendant de 1:5,000 à 1:500,000 (Howey, 2000). Noter que beaucoup de taches peuvent être employées en tous les deux qui vivent et cellules fixes.

Taches biologiques de base

Les différentes taches réagissent ou se concentrent dans différentes parties d'une cellule ou d'un tissu, et ces propriétés sont employées pour favoriser pour indiquer les pièces ou les secteurs spécifiques. Certaines des taches biologiques les plus communes sont énumérées ci-dessous. À moins qu'autrement marqués, tous ces colorants peuvent être employés avec les cellules et les tissus fixes ; des colorants essentiels (appropriés pour l'usage avec les organizations vivantes) sont notés.

Orange d'acridine

L'acridine orange (ao) de est un colorant cationique fluorescent sélectif d'acide nucléique utile pour la détermination de cycle de cellules. Elle est cellule-perméable, et agit l'un sur l'autre avec de l'ADN et l'ARN par l'intercalation ou les attractions électrostatiques. Si attachée à ADN, elle est très semblable spectralement à la fluorescéine.

Brun de Bismarck

Le Bismarck brun (aussi Bismarck brun brun de Y ou de Manchester) donne une couleur jaune aux mucines acides de que le brun de Bismarck peut être employé avec les cellules de phase.

Carmin

Le carmin est un colorant intensément rouge qui peut être employé pour souiller le glycogène , alors que l'alun de carmin est une tache nucléaire. Les taches de carmin exigent l'utilisation d'un mordant, habituellement l'aluminium .

Bleu de Coomassie

Le Coomassie bleu (aussi bleu brillant) souille nonspecifically des protéines une couleur bleue forte. Il est employé souvent dans l'électrophorèse de gel.

Violette en cristal

La violette en cristal , une fois combinée avec un mordant approprié, souille les murs du cellule pourpres. La violette en cristal est un composant important en souillure de gramme.

DAPI

Le DAPI est une tache nucléaire fluorescente du , excited la lumière ultra-violette du et en montrant la fluorescence bleue forte si attaché à ADN . DAPI n'est pas évident avec la microscopie de transmission régulière. Il peut être employé en vie ou cellules fixes.

Éosine

L'éosine est la plus employée souvent comme counterstain au haematoxylin, donnant une couleur rose ou rouge au matériel cytoplasmique du , les membranes de cellules de et quelques structures extracellulaires. Elle donne également une couleur rouge forte aux globules rouges de que l'éosine de peut également être employée comme counterstain dans quelques variantes de gramme souillant, et dans beaucoup d'autres protocoles. Il y a réellement deux composés très étroitement liés généralement désignés sous le nom de l'éosine. La plupart d'employé souvent est l'éosine Y (également connue sous le nom d'éosine Y WS ou éosine jaunâtre) ; il a une fonte très légèrement jaunâtre. L'autre composé d'éosine est l'éosine B (rouge bleuâtre ou impérial d'éosine) ; il a une fonte bleuâtre très faible. Les deux colorants sont interchangeables, et l'utilisation d'une ou l'autre est plus une question de préférence et de tradition.

Bromure d'éthidium

Le du bromure d'éthidium intercale et souille l'ADN, fournissant une tache rouge-orange fluorescente. Bien qu'il ne souille pas les cellules saines, il peut être employé pour identifier les cellules qui sont aux étapes finales du Apoptosis - de telles cellules ont des membranes beaucoup plus perméables en conséquence, le bromure d'éthidium est employé souvent comme marqueur pour l'apoptosis dans des populations de cellules et pour localiser des bandes de l'ADN dans le gélifier l'électrophorèse . La tache peut également être employée en même temps que l'acridine orange (ao) de dans le comptage de cellules viable. Cet EB/AO a combiné les cellules de phase de causes de tache pour produire par fluorescence vert tandis que les cellules apoptotic maintiennent la fluorescence rouge-orange distinctive.

Fuchsin

Le Fuchsin peut être employé pour souiller le collagène, le muscle lisse, ou les mitochondries .

Le fuchsin acide est utilisé généralement dans Masson trichrome et picro-fuchsin de van Gieson's, et a été employé dans une méthode plus ancienne pour souiller des mitochondries.

Haematoxylin

Le Haematoxylin (hematoxylin en Amérique du Nord) est une tache nucléaire. Utilisé avec un mordant, le haematoxylin souille des noyaux bleu-violets ou bruns. Il est le plus employé souvent avec de l'éosine dans le staining&mdash de H&E (haematoxylin et éosine) ; une des procédures les plus communes en histologie .

Taches de Hoechst

Le Hoechst est une BRI - le composé dérivé de de benzimidazole qui lie à la cannelure mineure de d'ADN . Employé souvent dans la microscopie de fluorescence pour ADN souillant, taches de Hoechst apparaissent le jaune une fois dissous dans les solutés et émettent la lumière bleue sous l'excitation UV. Il y a deux types importants de Hoechst : Hoechst 33258 et Hoechst 33342 . Les deux composés sont fonctionellement semblables, mais avec une petite différence en structure. Hoechst 33258 contient un groupe terminal de l'hydroxyle et est ainsi plus soluble dans le soluté, toutefois ce les caractéristiques réduit sa capacité de pénétrer la membrane de plasma . Hoechst 33342 contient une substitution éthylique du sur le groupe d'hydroxyle terminal (c. un groupe d'ethylether) la rendant plus hydrophobe pour un passage plus facile de membrane de plasma.

Iode

L'iode est employé dans la chimie comme indicateur pour l'amidon . Quand l'amidon est mélangé à de l'iode en solution, une couleur intensément bleu-foncé se développe, représentant un complexe d'amidon/iode. L'amidon est une substance commune à la plupart des cellules d'usine et ainsi une solution faible d'iode souillera l'amidon actuel dans les cellules. L'iode est un composant dans le technique de coloration connu sous le nom de gramme de souillant , utilisé en microbiologie .

La solution de Lugol de ou l'iode de Lugol (IKI) est une solution brune qui tourne le noir en présence des amidons et peut être employée comme tache de cellules, rendant les noyaux de cellules plus évidents.

Vert de malachite

Vert de malachite de (également connu sous le nom de vert de diamant B ou Victoria B) vert peut être employé comme counterstain bleu-vert au safranin dans le technique de coloration de Gimenez pour des bactéries. Il peut également être employé pour souiller directement les spores

Vert méthylique

Le vert méthylique est chimiquement lié à la violette en cristal, folâtrant un groupe méthylique ou éthylique supplémentaire.

Bleu de méthylène

Le bleu de méthylène est employé pour souiller les cellules animales, telles que les cellules humaines de joue, pour rendre leurs noyaux plus observables.

Rouge neutre

Noyaux neutres de taches du rouge (ou le rouge de toluylene) rouges. Il est habituellement employé comme counterstain en combination avec d'autres colorants.

Bleu du Nil

le Nil bleu (ou bleu du Nil A) souille des noyaux bleus. Il peut être employé avec les cellules vivantes.

Rouge du Nil

Le le Nil rouge (également connu sous le nom d'oxazone bleu du Nil) est constitué en bouillant le bleu du Nil avec de l'acide sulfurique . Ceci produit un mélange du rouge du Nil et du bleu du Nil. Le rouge du Nil est une tache liphophile du ; il s'accumulera dans des globules du lipide à l'intérieur des cellules, les souillant rouges. Le rouge du Nil peut être employé avec les cellules vivantes.

Tétroxyde d'osmium

Le tétroxyde d'osmium de est employé dans la microscopie optique pour souiller les lipides qu'elle se dissout en graisses, et est réduit par les matériaux organiques à l'osmium élémentaire, une substance noire facilement évidente.

Rhodamine

La rhodamine est une tache fluorescente spécifique de protéine utilisée généralement dans la microscopie de fluorescence.

Safranin

Safranin (ou Safranin O) est une tache nucléaire. Elle produit les noyaux rouges, et est employée principalement comme counterstain. Safranin peut également être employé pour donner une couleur jaune au collagène.

Microscopie électronique

Semblable à la photomicroscopie, taches peut être employé pour accentuer sélectivement les structures cellulaires dans la microscopie électronique de transmission . des composés Électron-denses des métaux lourds sont typiquement employés. Par exemple, l'acide phosphotungstique est une tache négative commun pour les polysaccharides des nerfs des virus et d'autres matériaux biologiques de tissu.

D'autres produits chimiques utilisés dans la souillure de microscopie électronique incluent le molybdate , l'iodure , Carbohydrazide , le chlorure ferrique , l'hexamine , le trichlorure , le nitrate , l'acétate de plomb , le citrate , fil d'ammonium de de cadmium de de de d'indium de de lanthane de de plomb de de (II) nitrate , tétroxyde d'osmium de , acide périodique , acide phosphomolybdique , ferricyanure de potassium de , ferrocyanure de potassium de , ruthénium rouge de , nitrate d'argent , chloroaurate de sodium de , nitrate de thallium de , Thiosemicarbazide , acétate d'uranyle de , nitrate d'uranyle , et Vanadyl sulfate .

Voir également

Dérivatisation
Cytologie : l'étude des cellules
Histologie : l'étude des tissus
Immunohistochemistry : l'utilisation des antisérums de marquer les antigènes spécifiques
Microscopie
Les catégories d'article pour le teint et colorants
Ruthénium de (II) tris (disulfonate de bathophenanthroline) , un colorant de protéine.

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