Microscopie

Microscopie MI de ·hôtes·Co·le PY (la prononciation mahy-kruh-skoh-font pipi). Elle est employée souvent plus spécifiquement comme technique d'utiliser un microscope. La microscopie a évolué avec le développement des microscopes. Par conséquent il y a trois branches principales de microscopie ; le optique, l'électron et le balayage de sondent la microscopie .

La microscopie optique et électronique implique la diffraction , la réflexion , ou la réfraction de l'incident de rayonnement sur le sujet de l'étude, et la collection suivante de ce rayonnement dispersé afin d'accumuler une image. Ce processus peut être suivi par l'irradiation large de champ de l'échantillon (par exemple photomicroscopie standard et microscopie électronique de transmission ) ou par le balayage d'un faisceau fin au-dessus de l'échantillon (par exemple microscopie confocal et microscopie électronique de balayage de . La microscopie de sonde de balayage de implique l'interaction d'une sonde de balayage de la surface ou de l'objet d'intérêt. Le développement de la biologie révolutionnée par microscopie et demeure un outil essentiel dans la cette Science , avec beaucoup d'autres.

Microscopie optique

Microscope optique La photomicroscopie optique ou implique de passer à la lumière visible transmise à travers ou réfléchie de l'échantillon par des objectifs simples ou multiples pour permettre une vue magnifiée de l'échantillon. L'image en résultant peut être détectée directement par l'oeil, reflètent d'un plat photographique ou digitalement capturé par de . L'objectif simple avec ses attachements, ou le système des objectifs et de l'équipement de formation image, avec le matériel d'éclairage approprié, prélèvent l'étape et l'appui, compose le photomicroscope de base.

Limitations de microscopie optique

Techniques optiques de microscopie de Microscopy#Super-Résolution Les limitations de la microscopie optique standard (microscopie lumineuse de champ de ) se situent dans trois secteurs ;
La technique peut seulement obscurité d'image ou fortement réfractant objecte effectivement.
La diffraction limite la résolution à approximativement 0.2 micromètre (le voient : Microscope de ).
Hors focale la lumière des points en dehors du plan focal réduit la clarté d'image.

Les cellules de phase manquent en particulier généralement du contraste suffisant à étudier avec succès, les structures internes de la cellule sont sans couleur et transparentes. La manière la plus commune d'augmenter le contraste est à la tache les différentes structures avec les colorants sélectifs, mais ceci implique de tuer et fixer l'échantillon. La souillure peut également présenter les objets façonnés , les détails structuraux apparents de qui sont provoqués par le traitement du spécimen et ne sont ainsi pas un dispositif légitime du spécimen.

Ces limitations ont, dans une certaine mesure, tous surmonté par les techniques spécifiques de microscopie qui peuvent d'une façon non envahissante augmenter le contraste de l'image. Généralement ces techniques se servent des différences dans l'indice de réfraction des structures cellulaires. Il est comparable au regard par une fenêtre en verre : vous (microscopie lumineuse de champ) ne voyez pas le verre mais simplement la saleté sur le verre. Il y a cependant une différence car le verre est un matériel plus dense, et ceci crée une différence dans la phase de la lumière passant à travers. L'oeil humain n'est pas sensible à cette différence dans la phase mais des solutions optiques intelligentes ont été pensées dehors pour changer cette différence dans la phase en différence dans l'amplitude (intensité de la lumière).

Techniques optiques de microscopie

Microscopie optique de champ lumineux

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lumineux de la microscopie de champ de La microscopie lumineuse de champ est la plus simple de toutes les techniques de photomicroscopie. L'illumination d'échantillon est par l'intermédiaire de lumière blanche transmise, c. illuminé de dessous et observé d'en haut. Les limitations incluent le bas contraste de la plupart d'échantillons biologiques et de basse résolution apparente dus à la tache floue de hors du matériel de foyer. La simplicité de la technique et la préparation minimale témoin exigée sont des avantages significatifs.

Illumination oblique

L'utilisation de l'illumination oblique du (du côté) donne à l'image un aspect à trois dimensions et peut accentuer les dispositifs autrement invisibles. Une technique plus récente basée sur cette méthode est le contraste , un système de la modulation de Hoffmann de trouvé sur les microscopes inversés pour l'usage dans la culture de cellules. L'illumination oblique souffre des mêmes limitations que la microscopie lumineuse de champ (bas contraste de beaucoup d'échantillons biologiques ; la basse résolution apparente due à hors des objets de foyer), mais peut accentuer les structures autrement invisibles.

Microscopie optique de champ foncé

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la microscopie de champ foncé de La microscopie de champ foncé est une technique pour améliorer le contraste des spécimens non souillés et transparents. L'illumination de Darkfield emploie une source lumineuse soigneusement alignée pour réduire au minimum la quantité de lumière (ONU-dispersée) direct-transmise écrivant l'avion d'image, rassemblant seulement la lumière dispersée par l'échantillon. Darkfield peut spectaculairement améliorer le contrast&mdash d'image ; particulièrement de l'objects&mdash transparent ; tout en exigeant peu d'équipement installer ou prélever la préparation. Cependant, la technique souffre de l'intensité de la basse lumière dans l'image finale de beaucoup d'échantillons biologiques, et continue à être affectée par basse résolution apparente.

L'illumination de Rheinberg de est une variante spéciale de l'illumination de champ foncé dans laquelle des filtres transparents et colorés sont insérés juste avant le condensateur de sorte que des rayons légers à la haute ouverture soient différemment colorés que ceux à la basse ouverture (c. le fond au spécimen peut être bleu tandis que l'objet apparaît jaune luminescent). D'autres combinaisons de couleur sont possibles mais leur efficacité est tout à fait variable.

Microscopie optique de contraste de phase

voient également : Microscope ,

contraste de phase de de la microscopie de contraste de phase de de dans la microscopie électronique : le Phase-contrastent la formation image

Des techniques plus sophistiquées montreront des différences dans la densité optique dans la proportion. Le contraste de phase de est une technique employée couramment qui montre des différences dans l'indice de réfraction comme différence en revanche. Il a été développé par les frittes de de physicien de Néerlandais Zernike dans les années 30 (pour ce qu'il a été attribué au prix Nobel en 1953). Le noyau dans une cellule par exemple apparaîtra obscurément contre le cytoplasme environnant. Le contraste est excellent ; cependant il ne sert pas avec les objets épais. Fréquemment, un halo est formé même autour de petits objets, qui obscurcit le détail. Le système se compose d'un anneau circulaire dans le condensateur qui produit un cône de lumière. Ce cône est superposé à un anneau classé semblable dans le phase-objectif. Chaque objectif a un anneau différent de taille, ainsi pour chaque objectif un autre arrangement de condensateur doit être choisi. L'anneau dans l'objectif a les propriétés optiques spéciales : il d'abord de tout réduit la lumière directe dans l'intensité, mais d'une manière primordiale, il crée une différence de phase artificielle environ d'une longueur d'onde quarte. Car les propriétés physiques de cette lumière directe ont changé, l'interférence avec la lumière diffractée se produit, ayant pour résultat l'image de contraste de phase.

Microscopie différentielle de contraste d'interférence

voient également :

différentiel de la microscopie de contraste d'interférence de

Le supérieur et beaucoup plus cher est l'utilisation du contraste d'interférence de . Les différences dans la densité optique apparaîtront comme différences dans le soulagement. Un noyau dans une cellule apparaîtra réellement comme globule dans le système différentiel du contraste d'interférence du le plus employé souvent selon le Georges Nomarski . Cependant, il doit maintenir dans l'esprit que c'est un effet optique de , et le soulagement ne ressemble pas nécessairement à la forme vraie ! Le contraste est très bon et l'ouverture de condensateur peut être entièrement ouverte utilisé, réduisant la profondeur du champ et maximisant de ce fait la résolution.

Le système se compose d'un prisme spécial (prisme de Nomarski de , prisme de Wollaston de ) dans le condensateur qui dédouble la lumière dans un ordinaire et un faisceau extraordinaire. La différence spatiale entre les deux faisceaux est minimale (moins que la résolution maximum de l'objectif). Après passage par le spécimen, les faisceaux sont réunis par un prisme semblable dans l'objectif.

Dans un spécimen homogène, il n'y a aucune différence entre les deux faisceaux, et aucun contraste n'est produit. Cependant, près d'une frontière réfringente (dire un noyau dans le cytoplasme), la différence entre l'ordinaire et le faisceau extraordinaire produira d'un soulagement dans l'image. Le contraste différentiel d'interférence exige d'une source de la lumière polarisée de fonctionner ; deux filtres polarisants doivent être adaptés dans le chemin léger, un au-dessous du condensateur (le polariseur), et l'autre au-dessus de l'objectif (l'analyseur).

Note : Dans les cas où la conception optique d'un microscope produit une séparation latérale appréciable des deux faisceaux que nous avons le cas de la microscopie classique d'interférence de , qui n'a pas comme conséquence des images en relief, mais peut néanmoins être employé pour la détermination quantitative des masse-épaisseurs des objets microscopiques.

Microscopie de fluorescence

voient également :

la microscopie de fluorescence

Quand certains composés sont illuminés avec la lumière de haute énergie, ils émettent alors la lumière d'une fréquence différente et inférieure. Cet effet est connu comme fluorescence . Souvent les spécimens montrent leur propre image caractéristique de l'Autofluorescence , basée sur leur maquillage chimique.

Cette méthode est d'importance critique en sciences de vie moderne, car elle peut être extrêmement sensible, permettant la détection des molécules simples. Beaucoup de différents colorants fluorescents peuvent être employés pour souiller différentes structures ou composés chimiques. Une en particulier méthode puissante est la combinaison des anticorps couplée à un fluorochrome comme dans le Immunostaining . Les exemples des fluorochromes utilisés généralement sont la fluorescéine ou la rhodamine . Les anticorps peuvent être faits travaillé spécifiquement pour un composé chimique. Par exemple, une stratégie est souvent en service la production artificielle des protéines, basée sur le code génétique (ADN). Ces protéines peuvent alors être employées pour immuniser les lapins, qui forment alors les anticorps qui lient à la protéine. Les anticorps sont alors couplés chimiquement à un fluorochrome et alors employés pour tracer les protéines dans les cellules à l'étude.

Les protéines fluorescentes très efficaces tel que la protéine fluorescente (GFP) de vert de ont été développées using la technique de la biologie moléculaire de la fusion de génique , un processus qui lie l'expression du composé fluorescent à celle de la protéine de cible. Cette protéine fluorescente combinée est généralement non-toxique à l'organization et interfère rarement la fonction de la protéine à l'étude. Les cellules ou les organizations génétiquement modifiées expriment directement les protéines fluorescent-étiquetées, qui permet l'étude de la fonction du original in vivo de protéine.

Puisque l'émission de fluorescence de diffère dans la longueur d'onde (couleur) de de la lumière d'excitation, une image fluorescente montre idéalement seulement la structure d'intérêt qui a été marqué avec le colorant fluorescent. Cette spécificité élevée a mené à l'utilisation répandue de la photomicroscopie de fluorescence dans la recherche biomédicale. Différents colorants fluorescents peuvent être employés pour souiller les différentes structures biologiques, qui peuvent alors être détectées simultanément, tout en étant toujours détail dû à la couleur individuelle du colorant.

Pour bloquer la lumière d'excitation d'atteindre observé ou le détecteur, les ensembles de filtre de de qualité sont nécessaires. Ceux-ci se composent typiquement d'un filtre de l'excitation choisissant la gamme des longueurs d'onde d'excitation un miroir dichroïque du , et d'un filtre de l'émission bloquant la lumière d'excitation. La plupart des microscopes de fluorescence sont actionnés en mode d'Epi-illumination (illumination et détection d'un côté de l'échantillon) pour diminuer plus loin la quantité de lumière d'excitation entrant dans le détecteur.

Voir également le microscope de fluorescence total de réflexion interne .

Microscopie de balayage Confocal de laser

voient également :

Confocal de la microscopie de balayage de laser Produit de l'image par une manière complètement différente que le microscope lumineux visuel normal de champ. Il donne une résolution légèrement plus élevée, mais d'une manière plus importante il fournit le sectionnement optique sans lumière inquiétante de dehors-de-foyer dégradant l'image. Par conséquent il fournit des images plus pointues des objets 3D. C'est employé souvent en même temps que la microscopie de fluorescence .

Microscopie de déconvolution

La microscopie de fluorescence est due extrêmement puissant à sa capacité de montrer les structures spécifiquement marquées dans un environnement complexe mais également en raison de sa capacité inhérente de fournir des informations tridimensionnelles des structures biologiques. Malheureusement cette information est brouillée par le fait, cela lors de l'illumination toutes les structures fluorescent marquées émettent la lumière aucune matière si elles sont au foyer ou pas. Ce le moyen, celui une image d'une certaine structure est toujours brouillé par la contribution de la lumière des structures qui sont hors focale. Ce phénomène devient évident comme perte de contraste particulièrement en employant les objectifs avec une puissance de résolution élevée, objectifs en général à immersion dans l'huile avec une haute ouverture numérique.

Heureusement cependant, ce phénomène n'est pas provoqué par des processus aléatoires tels que la dispersion de la lumière mais peut être relativement bien défini par les propriétés optiques de la formation d'image dans le système de formation image de microscope. Si on considère une petite source lumineuse fluorescente (essentiellement une tache lumineuse), la lumière venant de cette tache écarte dehors l'autre hors focale un est. Dans des conditions d'idéal ceci produit une sorte de " ; hourglass" ; forme de cette source ponctuelle dans la troisième dimension (axiale). Cette forme s'appelle la fonction de diffusion de point (PSF) du système de formation image de microscope. Puisque n'importe quelle image de fluorescence se compose d'un grand nombre de telles petites sources lumineuses fluorescentes l'image serait le " ; convolved par le function" de diffusion de point ;.

Connaissant des moyens de cette de point fonction de diffusion, cela il est possible de renverser ce processus dans une certaine mesure par des méthodes sur ordinateur généralement connues sous le nom de microscopie de la déconvolution . Il y a de divers algorithmes disponibles pour le 2D ou la déconvolution 3D. Ils peuvent être rudement classifiés dans le des méthodes fortifiantes non fortifiantes de et de . Tandis que les méthodes non fortifiantes peuvent améliorer le contraste par l'élimination hors de la lumière de foyer des plans focaux, seulement les méthodes fortifiantes peuvent réellement lui attribuer à nouveau la lumière point d'origine approprié. Ceci peut être un avantage par rapport à d'autres types de microscopie 3D tels que la microscopie confocal, parce que la lumière n'est pas gâchée mais est réutilisée. Pour 3D la déconvolution un fournit typiquement une série d'images dérivées de différents plans focaux (appelés Z-empiler) plus la connaissance du PSF qui peut être dérivé expérimentalement ou théoriquement de savoir tous les paramètres de contribution du microscope.

techniques optiques de microscopie de Secondaire-diffraction

Il est bien connu qu'il y ait une limite spatiale à laquelle la lumière peut se focaliser : moitié de approximativement de la longueur d'onde de la lumière que vous employez. Mais ce n'est pas une barrière vraie, parce que cette limite de diffraction est seulement vraie dans l'en champ lointain et précision de localisation peut être augmentée avec beaucoup de photons et d'analyse soigneuse (bien que deux objets ne peuvent pas encore être resolved) ; et comme la barrière saine , la barrière de diffraction est cassable. Cette section explore quelques approches aux objets plus petit que ~250 nanomètre de formation image. La majeure partie d'informations suivantes a été recueillie (avec la permission) de l'examen d'un blog de chimie des techniques de microscopie de secondaire-diffraction pièce I et partie II. Pour une revue, voir également la référence.

NSOM

Probablement la manière la plus conceptuelle de casser la barrière de diffraction est d'employer une source lumineuse et/ou un détecteur qui est elle-même nanomètre dans la balance. La diffraction car nous la savons est vraiment un effet en champ lointain : la lumière d'une ouverture est la transformée de Fourier de l'ouverture dans l'en champ lointain. Mais dans le proche-champ, toute la ceci n'est pas nécessairement le cas. le Proche-champ balayant les forces optiques de la microscopie (NSOM) s'allument par le bout minuscule d'une tirer fibre-et l'ouverture peut être sur l'ordre des dizaines de nanomètres. Quand le bout est apporté aux nanomètres à partir d'une molécule, la résolution n'est pas limitée par diffraction mais par la taille de l'ouverture de bout (parce que seulement cette une molécule verra la lumière sortir du bout). Une image peut être établie par un à ballayage récurrent du bout au-dessus de la surface pour créer une image.

La force du côté incliné à NSOM est le nombre limité de photons que vous pouvez expulser un bout minuscule, et l'efficacité minuscule de collection (si vous essayez de rassembler la fluorescence dans le proche-champ). D'autres techniques telles qu'ANSOM (voir ci-dessous) essayent d'éviter cet inconvénient.

Perfectionnement local/ANSOM/bowties

Au lieu de forcer des photons en bas d'un bout minuscule, quelques techniques créent une tache lumineuse locale dans une tache autrement diffraction-limited. ANSOM est NSOM apertureless : il emploie un bout très étroitement à un fluorophore pour augmenter le champ électrique local que le fluorophore voit. Fondamentalement, le bout d'ANSOM est comme un paratonnerre qui crée un point chaud de lumière.

Des nanoantennas de Bowtie ont été employés augmentent à considérablement et reproductible le champ électrique dans l'espace de nanomètre entre les bouts deux triangles d'or. Encore, le point est d'augmenter une région très petite d'une tache diffraction-limited, de ce fait améliorant la disparité entre la lumière et le nanoscale objet-et cassant la barrière de diffraction.

STED

Un favori récent est épuisement STED-stimulé d'émission. L'enfer de Stefan à l'institut maximum de Planck a développé cette méthode, qui emploie deux impulsions de laser. La première impulsion est une tache diffraction-limited qui est accordée à la longueur d'onde d'absorption, excite ainsi tous les fluorophores dans cette région ; une deuxième impulsion immédiate rouge-est décalée à la longueur d'onde d'émission et stimule l'émission de nouveau à l'état fondamental avant, de ce fait depeting l'état excited de tous les fluorophores dans cette impulsion d'épuisement. Le tour est que l'impulsion d'épuisement passe par un modulateur de phase qui fait l'impulsion illuminer l'échantillon sous forme de beignet, so que la partie externe de la tache limitée par diffraction est épuisée et le petit centre peut encore fluoresce. En saturant l'impulsion d'épuisement, le centre du beignet devient plus petit et plus petit jusqu'à ce qu'ils puissent obtenir la résolution des dizaines de nanomètres.

Cette technique exige également un à ballayage récurrent comme NSOM et microscopie de balayage Confocal de laser de standard .

Ajustement du PSF

Les méthodes au-dessus (et ci-dessous) des techniques expérimentales d'utilisation pour éviter la barrière de diffraction, mais une peuvent également employer l'analyse astucieuse pour augmenter la capacité de savoir où un objet de nanoscale est localisé. L'image d'une source ponctuelle sur un l'appareil-photo du dispositif qu'à couplage de charge s'appelle un Point-a écarté la fonction (PSF), qui est limitée par diffraction pour n'être aucune moins qu'approximativement moitié de la longueur d'onde de la lumière. Mais il est possible d'équiper simplement ce PSF d'un gaussien pour localiser le centre le PSF-et ainsi d'endroit du fluorophore. La précision près dont cette technique peut localiser le centre dépend du nombre de photons rassemblés (aussi bien que la taille de Pixel de CCD et d'autres facteurs). Sans se soucier, les groupes comme le laboratoire de Selvin et beaucoup d'autres ont utilisé cette analyse pour localiser les fluorophores simples à quelques nanomètres. Ceci, naturellement, exige des mesures précises et de rassemblement beaucoup de photons de .

PAUME ET ORAGE

Quel ajustage de précision un PSF est à la localisation, la microscopie photo-activée de localisation (PALM) est au " ; resolution" ; - ce terme ici est employé de manière imprécise pour signifier mesurer la distance entre les objets, la résolution optique non véritable. Eric Betzig et collègues a développé la PAUME ; Xiaowei Zhuang à Harvard a employé les techniques et les appels semblables il ORAGE : microscopie optique stochastique de reconstruction. Les lieux de base des deux techniques sont de remplir secteur de formation image de beaucoup de fluorophores foncés qui peuvent photoactivated dans un état brillant par fluorescence par un flash de lumière. Puisque la photoactivation est le stochastique, seulement uns, " bien séparé de molécules ; tourner on." ; Alors Gaussians sont adaptés à leur PSFs à la haute précision (voir la section ci-dessus). Après le quelque photobleach lumineux de points, un autre flash de la lumière photoactivating active les fluorophores aléatoires encore et le PSFs sont adaptés de ces différents objets bien espacés. Ce processus est répété beaucoup de fois, accumulant une molécule-par-molécule d'image ; et parce que les molécules ont été localisées à différentes heures, le " ; resolution" ; de la finale l'image peut être beaucoup plus haute que cela limitée par diffraction.

Le problème majeur avec ces techniques est celui pour obtenir ces belles images, il prend l'ordre des heures pour rassembler les données. Ce n'est certainement pas la technique pour étudier la dynamique (l'ajustement du PSF est meilleur pour celui).

Illumination structurée

Il y a également l'approche de structurer-illumination (SI) de large-champ à casser la limite de diffraction de la lumière. SI-ou modelé illumination-compte sur des protocoles spécifiques de microscopie et l'analyse étendue de logiciel post-exposition. Mais, parce que le SI est une technique de large-champ, il peut habituellement saisir des images à un taux plus élevé que des arrangements confocal-basés comme le STED . (C'est seulement une généralisation, parce que le SI n'est pas réellement rapide superbe. Je suis sûr que quelqu'un pourrait rendre STED rapide et SI lent !) Le concept principal du SI est d'illuminer un échantillon avec la lumière modelée et d'augmenter la résolution en mesurant les franges dans le modèle de Moiré de (de l'interférence du modèle d'illumination et de l'échantillon). " ; l'information Autrement-inobservable d'échantillon peut être déduite des franges et informatique du restored." ;

Le SI augmente la résolution spatiale en collectant des informations de l'espace de fréquence en dehors de la région observable. Ce processus est fait dans l'espace réciproque : la transformée de Fourier (pi) de d'une image de SI contient des informations supplémentaires superposées de différents secteurs de l'espace réciproque ; avec plusieurs armatures avec l'illumination a décalé par une certaine phase, il est possible informatique de séparer et reconstruire l'image de pi, qui a beaucoup plus d'information de résolution. Le pi renversé renvoie l'image reconstruite à une image de superbe-résolution.

Mais ceci augmente seulement la résolution par un facteur de 2 (parce que le modèle de SI ne peut pas être focalisé à n'importe quoi plus petit que la moitié de la longueur d'onde de la lumière d'excitation). À un accroissement plus ultérieur la résolution, vous pouvez présenter les non-linéarités de , qui apparaissent en tant qu'harmoniques évolués en pi. Un tel dispositif pourrait fournir la résolution à la balance de nanomètre et être absolument non destructif, mais ce n'est pas ainsi développé puits comme microscope optique ou microscope électronique .

Microscopie de balayage de sonde

C'est une technique de secondaire-diffraction. Les exemples des microscopes de sonde de balayage sont le microscope atomique (AFM) de force de , le microscope de perçage d'un tunnel de balayage de et le microscope photonique de force de . Toutes telles méthodes impliquent un bout plein de sonde à proximité ( près de champ ) d'un objet, qui est censé être presque plat. Pour plus de détail, voir la microscopie de sonde de balayage de .

Microscopie ultrasonique de force

La microscopie ultrasonique de force (UFM) a été développée afin d'améliorer les détails et le contraste d'image sur le " ; flat" ; centres d'intérêt où les images d'AFM sont limitées en revanche. La combinaison d'AFM-UFM permet un champ proche à l'image microscopique acoustique d'être produite. Le bout d'AFM est employé pour détecter les ondes ultrasoniques et surmonte la limitation de la longueur d'onde qui se produit dans la microscopie acoustique. En employant les changements élastiques sous le bout d'AFM, une image d'un détail beaucoup plus grand que la topographie d'AFM peut être produite.

La microscopie ultrasonique de force permet la cartographie locale de l'élasticité dans la microscopie atomique de force par l'application de la vibration ultrasonique à l'encorbellement ou à l'échantillon. Afin d'essayer d'analyser les résultats de la microscopie ultrasonique de force d'une mode quantitative, une mesure de courbe de force-distance est faite avec la vibration ultrasonique appliquée à la base en porte-à-faux, et les résultats sont comparés à un modèle de l'interaction en porte-à-faux de dynamique et d'incliner-échantillon basée sur la technique de différence-finie.

Microscopie infrarouge

Le microscope infrarouge limite couvre deux types principaux de microscopie diffraction-limited. Le premier fournit la visualisation optique plus la collecte de données spectroscopique d'IR. La deuxième technique (plus récente et plus avancée) utilise la détection de rangée de plan focal de pour la formation image chimique infrarouge, où le contraste d'image est déterminé par la réponse de différentes régions d'échantillon aux longueurs d'onde particulières d'IR choisies par l'utilisateur.

Versions d'IR de microscopie de secondaire-diffraction (voir ci-dessus) exister également. Celles-ci incluent IR NSOM et microspectroscopy photothermique.

Microscopie d'amateur

La microscopie d'amateur de est la recherche et l'observation du biologique et des spécimens sans enzymes pour des buts récréationnels using un microscope optique (photomicroscopes) de . Les collecteurs des minerais , des insectes , des Seashells et des usines peuvent utiliser les microscopes comme outils pour découvrir les dispositifs qui les aident le pour classifier leurs articles rassemblés. D'autres amateurs peuvent être intéressés à observer la vie trouvée dans l'eau d'étang et d'autres échantillons. Les microscopes peuvent également s'avérer utile pour l'évaluation de qualité de l'eau pour les personnes qui gardent un aquarium de maison de . La documentation et le schéma photographiques des images microscopiques sont des tâches additionnelles qui augmentent l'éventail des tâches de l'amateur. Il y a même des concours pour des participants du photomicrographe art. de de ce passe-temps peut employer les glissières microscopiques préparées dans le commerce ou peut s'engager dans la tâche de la préparation de specimens.

Tandis que la microscopie est un outil central dans la documentation des spécimens biologiques, il est rarement suffisant de justifier la découverte de l'de nouvelles espèces basées sur seules des investigations microscopiques. Les essais souvent génétiques et biochimiques sont nécessaires pour confirmer la découverte de l'de nouvelles espèces. Un laboratoire entièrement équipé peut être nécessaire, quelque chose souvent non disponible aux amateurs. Pour cette raison il peut être peu probable que les microscopistes d'amateur soient capables de justifier leur trouvaille jusqu'au degré pour rapporter une publication scientifique.

Vers la fin de 1800's la microscopie d'amateur est devenue un passe-temps populaire les Etats-Unis et en Europe. Le John Phin de professeur a édité le " ; Conseils pratiques sur le choix et l'utilisation du microscope (deuxième édition, 1878), " ; et était également le rédacteur « du journal américain de la microscopie. »

Voir également

Condensateur d'Abbe
Illumination de Köhler de
microscopie d'excitation de Deux-photon de

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