Microarray de protéine

Un microarray de protéine de est un morceau de verre sur lequel différentes molécules de protéine ont été apposées aux endroits séparés d'une façon commandée formant de ce fait une rangée microscopique. Ceux-ci sont employés pour identifier des interactions de protéine-protéine, pour identifier les substrats des kinases de protéine ou pour identifier les cibles de petites molécules biologiquement actives. Le microarray de protéine le plus commun est le microarray d'anticorps de , où des anticorps sont repérés sur le morceau de protéine et sont employés en tant que molécules de capture de pour détecter des protéines des solutions de Lysate de cellules.

Les technologies relatives de microarray incluent également les microarrays de tissu de des microarrays d'anticorps de des microarrays d'ADN de et les Microarrays de composé chimique de

Applications

Les microarrays (aussi biopuce de protéine de de , le proteinchip ) sont des dispositifs de mesure utilisés dans des applications biomédicales pour déterminer la présence et/ou la quantité (désignées sous le nom de la quantitation) de protéines dans les échantillons biologiques, par exemple le sang . Ils ont le potentiel d'être un outil important pour la recherche de Proteomics . Habituellement une multitude de différents agents de capture, plus souvent les anticorps monoclonaux , sont déposées sur une surface de morceau (verre ou silicium) dans une rangée miniature. Ce format souvent désigné également sous le nom d'un microarray (une limite plus générale de pour les dispositifs biologiques à puces de mesure).

Types de morceaux

Il y a plusieurs types de morceaux de protéine, être le plus commun des morceaux de plaque en verre et des rangées de nano-bien.

Production des rangées de protéine

Les protéines peuvent être extérieurement synthétisées, épurées et attachées à la rangée. Alternativement elles peuvent être in-situ synthétisé et directement attaché à la rangée.

Les protéines peuvent être synthétisées par la biosynthèse , l'expression sans cellule ou la synthèse chimique d'ADN de . La synthèse in-situ est possible avec les derniers deux. Avec l'expression sans cellule d'ADN, des protéines sont attachées vers le juste de soutien après leur production. Des peptides chimiquement obtenus par la synthèse de peptide de phase pleine sont déjà attachés à l'appui. Le deprotection sélectif est effectué par des méthodes lithographiques ou par la soi-disant Tache-synthèse.

Objets façonnés à éviter

1) Pour éviter la variabilité de résultats vous veiller pour devoir un lysis très efficace de l'amortisseur. Employer les conditions de traitement d'àéchantillon conformé ; 2) Beaucoup d'anticorps ne fonctionnent pas bien comme réactifs de capture, même si ils fonctionnent bien en conditions épongeantes et autres de dénaturisations occidentales. Quelques anticorps lient souvent mal aux protéines intactes dans un extrait de cellules ; 3) Les différentes protéines aiment différents états de solution, ainsi si vous ne voyez pas l'attache il ne signifie pas qu'il n'y a aucune attache entre les deux associés en états physiologiques ; 4) Ajuster les conditions de corps dissous pour éviter l'association non spécifique : changer la concentration en sel, pH, ajouter l'alignate de 1% ; 5) sur la surface de la rangée la protéine conjuguée devrait être dans la bonne conformation (c., plié, non dénaturé), ancrée par le même acide aminé (dans la même orientation), et soit gardée à partir de la surface par un éditeur de liens pour éviter l'obstacle stérique.

Types de molécules de capture

Les molécules de capture utilisées sont le plus généralement les anticorps ; cependant, plus récemment il y a eu une poussée vers d'autres types de molécules de capture qui sont plus semblables en leur nature telle que des peptides ou des aptamers. Les anticorps ont plusieurs problèmes comprenant le fait qu'il n'y a pas des anticorps pour la plupart des protéines et également des problèmes avec la spécificité dans quelques préparations commerciales d'anticorps. Néanmoins, les anticorps représentent toujours l'agent de capture de protéine bien-caractérisé et le plus efficace pour des microarrays. Récemment, des acides nucléiques, les récepteurs, les enzymes, et les protéines ont été repérés sur des morceaux et employés comme molécules de capture. Ceci permet à une vaste variété d'expériences d'être conduits sur des interactions de protéine-protéine, et à tous autres substrats obligatoires de protéine.

Méthodes de détection

Bien que les microarrays de protéine puissent employer les méthodes de détection semblables comme Microarrays d'ADN, un problème est que les concentrations en protéine dans un échantillon biologique peuvent être beaucoup d'ordres de grandeur différents de celui pour des mRNAs. Par conséquent, les méthodes de détection de morceau de protéine doivent avoir une portée de détection beaucoup plus étendue.

La méthode preferred de détection est actuellement détection de la fluorescence . La détection fluorescente est sûre, sensible, et peut avoir une résolution. La méthode de détection fluorescente est compatible avec les modules de balayage standard de microarray, toutefois quelques changements mineurs au logiciel peuvent devoir être apportés.

Voir également

Microarray d'anticorps de
Microarray de composé chimique de
Microarray d'ADN de
Microarray de tissu de
MicroArray de et expression de gène (MAGE)

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