Marche d\'amorce

L'amorce de marche de est un ordonnançant la méthode de de choix pour ordonnancer des fragments d'ADN entre 1.3 et 7 fragments des kilobases tels être trop long pour être ordonnancé dans un ordre simple lisent suivre la méthode cyclique de terminateur de dideoxy (également connue sous le nom d'ordonnancement de dideoxy basé par ACP ou méthode automatisée de Sanger). L'ADN d'intérêt peut être une insertion du plasmide , un produit de l'ACP ou un fragment représentant un espace en ordonnançant un génome. Car la méthode traditionnelle d'arrêt de chaîne de ne permet pas à de longues rives d'ADN d'être ordonnancées, des travaux de cette méthode à côté de diviser le long ordre en plusieurs short consécutif ceux.

Le " de limite ; walking" d'amorce ; est employé où le but principal est d'ordonnancer le génome. Le " de limite ; walking" de chromosome ; est employé à la place quand nous savons l'ordre mais n'a pas un clone d'un gène. Par exemple le gène pour une maladie peut être situé près d'un PTFR sur l'ADN.

Le fragment est d'abord ordonnancé comme si c'étaient un fragment plus court - l'ordonnancement sera effectué de chaque extrémité using les amorces universelles ou les amorces indiquées par le client. Ceci devrait identifier les 1000 premières (approximativement) bases. Afin d'ordonnancer complètement la région de la conception d'intérêt et la synthèse de nouvelles amorces - complémentaires aux 20 bases finales de l'ordre connu est nécessaire pour obtenir l'information contiguë d'ordre.

La technique de base est comme suit : Une amorce qui assortit le commencement de l'ADN à l'ordre est utilisée pour synthétiser une rive courte d'ADN à côté de l'ordre inconnu, commençant par l'amorce (voir l'ACP ).

  • La nouvelle rive d'ADN de short est ordonnancée suivre la méthode d'arrêt de chaîne de .
  • L'extrémité de la rive ordonnancée est employée comme amorce pour la prochaine partie du long ordre d'ADN. De cette façon, la partie courte de la longue ADN qui est " ordonnancé de subsistances ; walking" ; le long de l'ordre. La méthode peut être employée pour ordonnancer les chromosomes entiers (ainsi, chromosome de marche de ). Une méthode différente avec le même but qui devient plus populaire pour l'ordonnancement à grande échelle (par exemple, le Projet génome humain ) est fusil de chasse de ordonnançant .

    Voir également

    Fusil de chasse de ordonnançant - une méthode alternative, using aléatoire, plutôt que consécutif, secondaire-rives.

    • olecular-biologie-moignon

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