Immunofluorescence

L'immunofluorescence est l'étiquetage des anticorps ou les antigènes avec le fluorescent technique des colorants de cette est employé souvent pour visualiser la distribution sous-cellulaire des biomolécules d'intérêt. des sections Immunofluorescent-marquées de tissu sont étudiées using un microscope de fluorescence ou par la microscopie Confocal .

Le plus généralement, l'immunofluorescence utilise deux ensembles d'anticorps : un anticorps primaire est employé contre l'antigène d'intérêt ; on présente un anticorps suivant, secondaire, teindre-couplé qui identifie l'anticorps primaire. De cette fa4con le chercheur peut créer plusieurs anticorps primaires qui identifient de divers antigènes, mais, parce qu'ils tous partagent une région constante commune, peut être reconnu par un anticorps teindre-couplé simple. Typiquement ceci est fait en employant des anticorps faits dans différentes espèces. Par exemple, un chercheur pourrait créer les anticorps dans une chèvre qui identifient plusieurs antigènes, et puis emploie les anticorps teindre-couplés de lapin qui identifient la région constante d'anticorps de chèvre (anti-chèvre dénotée de lapin). Ceci permet la réutilisation des anticorps teindre-couplés parfabrication dans des expériences multiples.

Dans certains cas, il est avantageux d'employer les anticorps primaires directement marqués avec un fluorophore. Ce étiquetage direct diminue le nombre d'étapes du procédé de souillure et, d'une manière primordiale, évite souvent des problèmes d'activité hétérospécifique et de fond élevé. Le de étiquetage fluorescent peut être exécuté en plus moins d'une heure avec les lots d'étiquettes facilement disponibles.

Comme avec la plupart des techniques de fluorescence, un problème significatif avec l'immunofluorescence est Photobleaching . La perte d'activité provoquée par photobleaching peut être commandée en réduisant l'intensité ou la période de l'exposition à la lumière, en augmentant la concentration des fluorophores, ou en utilisant des fluorophores plus robustes qui sont moins à de blanchiment enclin (par exemple Alexa Fluors ou DyLight Fluors .

Beaucoup d'utilisations de l'immunofluorescence outmoded par le développement des protéines de recombinaison contenant des domaines fluorescents de protéine, par exemple la protéine fluorescente verte (GFP) de . Utilisation d'un tel " ; tagged" ; les protéines permet une localisation bien meilleure et moins de rupture de fonction de protéine.

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