Fragment d\'Okazaki
Un fragment d'Okazaki de est un fragment relativement court d'ADN (avec une amorce d'ARN aux 5 ' terminus) créée sur la rive de ralentissement pendant la réplique d'ADN de . Il a été à l'origine découvert en 1968 par le Reiji Okazaki , le Tsuneko Okazaki , et leurs collègues tout en étudiant la réplique de l'ADN du bactériophage dans le Escherichia coli de .
Quand la rive de ralentissement est repliée sur la rive originale, le modèle 5 ' - 3 ' doit être employé ; ainsi une petite discontinuité se produit et forme d'un fragment d'Okazaki. Ces fragments sont traités par les machines de réplique pour produire une rive continue de l'ADN et par conséquent d'une spirale complète d'ADN de fille.
En faisant face à la synthèse de l'ADN complémentaire échoue le naissant que la principale rive lit toujours le 5 ' à 3 ' . Sa rive antiparallèle de complément du , la rive de ralentissement naissante lit de 3 ' à 5 '. Puisque les rives originales de l'ADN sont antiparallèles, et seulement une nouvelle rive continue peut être synthétisée la ' extrémité aux 3 de la principale rive due polarité 5 ' - 3 à la ' intrinsèque des ADN polymérases, L'autre rive doit se développer de manière discontinue dans la direction opposée. Concernant la rive de ralentissement, le résultat de la réplique discontinue de cette rive est la production d'une série de sections courtes des fragments d'Okazaki appelés par ADN. Preuve expérimentale de : Chaque fragment d'Okazaki est lancé près de la fourche de réplication à une amorce d'ARN créée par le Primase , et prolongée par l'ADN polymérase De III . Dans les eukaryotes, la synthèse de rive de ralentissement est effectuée par le δ d'ADN polymérase. L'amorce plus tard est enlevée par les enzymes qui ont l'activité endonucleolytic telle que la ribonucléase H (RNase H ), les ribonucléases (marais) d'aileron de et le Dna2 helicase/nucleases. Dans les Prokaryotes la nucléase de MARAIS est un domaine de l'ADN polymérase I tandis que dans les Eukaryotes les marais sont les enzymes séparées. Les bases excisées d'ARN sont remplacées avec de l'ADN par l'ADN polymérase De I dans le δ de prokaryotes ou d'ADN polymérase Dans les eukaryotes. Des fragments contigus sont alors liés ensemble par la ligase DNA, using les liens de Phosphodiester de , pour créer une rive continue de l'ADN.
Okazaki a employé un type expérience de chasse d'impulsion pour confirmer la réplique discontinue de rive. Il a pris replier activement l'ADN, puis a ajouté le " ; hot" ; nucléotides contenant du tritium pour une impulsion courte d'environ 5 secondes. Pendant les 5 secondes les nucléotides radioactifs ont été incorporés aux rives croissantes d'ADN. Après l'impulsion Okazaki a chassé avec le " ; cold" ; nucléotides non étiquetés pour des nombres de heures variables et rapidement d'isolement l'ADN. L'ADN a été centrifugée et alors analysée la radioactivité. Quel Okazaki trouvé était cela avec des chasses courtes d'environ 7 à 15 secondes plus de la radioactivité a été trouvé dans les petits fragments plus hauts dans le tube après centrifugeuse. Cependant avec de plus longues chasses plus de radioactivité a été trouvée dans les rives inférieures et plus grandes. Ceci a confirmé que pendant la synthèse les premiers petits fragments sont formés sur la rive de ralentissement, puis ces fragments sont combinés et plus tard incorporés à des rives beaucoup plus grandes. Les petits fragments trouvés sur la rive de ralentissement s'appellent les fragments d'Okazaki.
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