Cellule de HEK

Les cellules embryonnaires humaines de rein de , également connues sous le nom de cellules du HEK, le HEK 293 ou juste les cellules du 293, sont une variété de cellule à l'origine dérivée, car leur nom indique, du rein humain embryonnaire du . Des cellules de HEK ont été développées dans la culture de tissu pendant beaucoup d'années et sont devenues très employées couramment. Elles sont très faciles à se développer et transfect très aisément et ainsi sont employées couramment dans la recherche de la biologie de cellules de . Elles sont également employées par l'industrie de la biotechnologie pour produire les protéines et les virus thérapeutiques pour la thérapie génique .

Origines des cellules de HEK

Des cellules de HEK 293 ont été produites par la transformation des cultures des cellules embryonnaires humaines normales de rein avec de l'ADN cisaillée de l'adénovirus 5 de dans le laboratoire d'Alex Van der Eb à Leyde, Hollande dans le 70s tôt. Les cellules embryonnaires humaines de rein ont été obtenues à partir d'un foetus avorté sain et à l'origine cultivées par Van der Eb lui-même, et la transformation par l'adénovirus a été exécutée par Frank Graham qui a édité ses résultats vers la fin des années 70 après qu'il ait quitté Leyde pour l'université de McMaster au Canada (Graham 1977). Elles s'appellent le HEK pour le rein embryonnaire humain, alors que le numéro 293 vient de l'habitude de Graham de numéroter ses expériences ; le clone original de cellules de HEK 293 était simplement le produit de sa 293rd expérience.

L'analyse suivante a prouvé que la transformation a été provoquée par une insertion se composant de ~4.5 kilobases du bras gauche du génome viral, qui est devenu incorporé au chromosome humain 19 (Louis 1997).

Pendant beaucoup d'années on l'a supposé que des cellules de HEK 293 ont été produites par transformation d'une cellule fibroblastique, endothéliale ou épithéliale qui sont abondantes en rein. Cependant le fait que les cellules ont provenu des cellules cultivées de rein ne fait pas dire beaucoup au sujet de l'origine cellulaire exacte du HEK 293, comme les cultures embryonnaires de rein peuvent contenir un nombre restreint de presque tous les types de cellules des corps. En fait Graham et les collègues plus récemment ont fourni l'évidence que les cellules de HEK 293 et plusieurs autres variétés de cellule humaines produites par la transformation d'adénovirus des cellules embryonnaires humaines de rein ont beaucoup de propriétés des neurones non mûrs, suggérant que l'adénovirus ait été pris et ait transformé une cellule neuronale de lignée dans la culture originale de rein (Shaw et autres 2002).

Utilisations des cellules de HEK 293

Comme variété de cellule expérimentalement transformée, les cellules de HEK ne sont pas un modèle particulièrement bon pour les cellules normales, des cellules du Cancer , ou aucun autre genre de cellule qui est un objet fondamental de recherche. Cependant, elles sont extrêmement faciles à travailler avec, étant franches à la culture et au transfect , et ainsi peuvent être employées dans les expériences dans lesquelles le comportement de la cellule lui-même n'est pas d'intérêt. Typiquement, ces expériences impliquent de transfecting dans un gène (ou la combinaison des gènes) d'intérêt, et puis d'analyser la protéine exprimée ; essentiellement, la cellule est employée simplement comme tube à essai avec une membrane. L'utilisation répandue de cette variété de cellule est due à son transfectability extrême par la méthode du phosphate de calcium , réalisant des efficacités approchant 100% comme déterminée par FACS using un amortisseur 2XPBS. Une efficacité inférieure pourrait être réalisable avec un amortisseur de HBS.

Une variante importante de cette variété de cellule est la variété de cellule 293T qui contient, en outre, le grand T antigène du SV40 , qui tient compte de la réplique episomal des plasmides transfected contenant l'origine SV40 de la réplique. Ceci tient compte de l'amplification des plasmides transfected et de l'expression temporelle prolongée des produits désirés de gène. Noter que n'importe quelle variété de cellule pareillement domestiquée peut être employée pour cette sorte de travail ; Le hela, le COS et la cellule chinoise d'ovaire de hamster de sont des solutions de rechange communes.

Les exemples de telles expériences incluent :
Étude du

A des effets d'une drogue sur des canaux de sodium * Essai d'un système induisible de l'interférence d'ARN de * Essai d'un agoniste isoform-sélectif de la protéine kinase de C * Recherche sur l'interaction entre deux protéines * Analyse d'un signal nucléaire d'exportation de dans une protéine

Une utilisation plus spécifique des cellules de HEK est dans la propagation des vecteurs adenoviral de que les virus de offrent des moyens extrêmement efficaces de livrer des gènes dans des cellules, puisqu'est ce ce qu'elles ont évolué pour faire, et sont utiles ainsi grand en tant qu'outils expérimentaux. Cependant, comme les microbes pathogènes ils présentent également un degré de danger à l'expérimentateur. Ce danger peut être évité en employant les virus qui manquent des gènes principaux, et qui ne peuvent pas ainsi replier après avoir écrit une cellule. Afin de propager de tels vecteurs viraux, une variété de cellule qui exprime les gènes absents est exigée. Puisque les cellules de HEK expriment un certain nombre de gènes adenoviral, elles peuvent être employées pour propager les vecteurs adenoviral dans lesquels ces gènes (typiquement, E1 et E3) sont supprimés, comme AdEasy (il 1998).

293, et particulièrement 293T, cellules sont utilisés généralement pour la production du des vecteurs retroviral lentiviral de et . De diverses variétés de cellule de empaquetage retroviral et lentiviral sont basées sur ces cellules.

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