Amplification rapide des extrémités de cDNA
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RACE , ou l'amplification rapide de du cDNA finit , est une technique employée dans la biologie moléculaire pour amplifier les extrémités des transcriptions de l'ARN de messager (ADN messagère) using une réaction en chaîne spécialisée de transcription-polymérase renversée ( RT-PCR ). Il permet l'amplification d'une partie périphérique inconnue d'une transcription using l'information connue du centre de la transcription. Il peut être employé pour obtenir extrémité (3 ' RACE-PCR) du du 5 la ' extrémité (5 ' RACE-PCR) ou 3 la ' de l'ADN messagère. Cette technique s'appelle parfois le l'ACP unilatéral ou l'ACP ancré par .
Les protocoles pour RACE 5 ' ou 3 ' diffèrent légèrement. 5 ' RACE-PCR commencent à employer l'ADN messagère comme calibre pour un premier rond de la réaction de synthèse de cDNA (ou transcription renversée ) using un détail (renversé) antisens d'amorce de l'oligonucléotide du qui identifie l'ordre connu dans le gène d'intérêt ; l'amorce s'appelle une amorce spécifique (système de préférences généralisées) de gène de et les copies le calibre d'ADN messagère dans la direction aux 3 ' 5 ' pour produire d'un spécifique choisissent le produit échoué de cDNA. La première synthèse suivante de cDNA de rive, la transférase terminale (TdT) de deoxynucleotidyl de des enzymes est employée pour ajouter une queue homopolymeric (c. une corde de nucléotides identiques ' extrémité aux 3 du cDNA. Une réaction de l'ACP est alors effectuée, qui utilise une amorce spécifique du deuxième gène antisens (GSP2) cette des grippages à l'ordre connu, et une amorce universelle (vers l'avant) de général de sens (UP) qui lie la queue homopolymeric supplémentaire à l'extrémité des 3 des ' extrémités des cDNAs, pour amplifier un produit de cDNA 5 '.
l'extrémité aux 3 ' RACE-PCR utilise la queue polyA normale qui existe 3 ' de tous les mRNAs pour amorcer pendant la transcription renversée, ainsi cette méthode n'exige pas l'addition des nucléotides par TdT. Les premiers cDNAs de rive sont produits using un Oligo-décollement - l'amorce de d'adapteur qui complète le bout droit de la polyA et ajoute un ordre spécial d'adapteur la ' extrémité aux 3 de chaque cDNA. L'ACP est alors employé pour amplifier le ' cDNA 3 d'une région connue dans le cDNA spécifique using un système de préférences généralisées de sens, et une amorce antisens complémentaire à l'ordre supplémentaire d'adapteur.
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