Affichage de ribosome

L'affichage de ribosome de est une technique employée pour exécuter l'évolution in vitro de la protéine du pour créer les protéines qui peuvent lier à un Ligand désiré . Le processus a comme conséquence les protéines traduites qui sont associées à leur ancêtre du ADN messagère qui est habitué, comme complexe, pour lier à un ligand immobilisé dans une étape de choix de . Les hybrides d'ADN-protéine qui lient bien sont alors le transcrit renversé au CDNA et leur ordre amplifié par l'intermédiaire de l'ACP . Le résultat final est un ordre du nucléotide qui peut être employé pour créer les protéines étroitement contraignantes.

Le processus

L'affichage de ribosome de se rapporte aux reliures de protéine aux lesquelles sont le non- en covalence lié et produit des ordres du CDNA contenant un ordre de l'instigateur de transcription et les extrémités connues qui seront des poignées pour l'ACP . Ce CDNA est créé et puis transcrit en ADN messagère . On ajoute le TRNA et les ribosomes qui procède traduire le ADN messagère en protéine jusqu'à ce qu'il atteigne ' la base des 3 artificielle qui fait faire une pause le ribosome. La température est alors abaissée et du sel est ajouté pour rendre le complexe ADN-ribosome-traduit de protéine plus stable. Le complexe de totalité est alors employé dans l'étape obligatoire de choix.

La prochaine étape en cours d'affichage de ribosome est de commencer à choisir pour des choses intéressant la conservation. L'étape de choix implique typiquement une colonne de la chromatographie d'affinité d'un lit de résine contenant les ligands que vous souhaitez la protéine pour lier à. Les reliures sont courues sur la colonne et ceux qui lient bien sont immobilisés. Élution suivante des reliures par l'intermédiaire des concentrations élevées en sel ou des ligands mobiles qui complexe avec le motif obligatoire de la protéine permettant la dissociation de l'ADN messagère. L'ADN messagère peut alors être inverse transcrit de nouveau dans le cDNA, pourrait être subie une mutation par l'intermédiaire des méthodes de la mutagénèse , et être alimentée par le processus avec de la plus grande pression sélective d'isoler encore de meilleures reliures.

Avantages d'affichage de ribosome

En ayant l'ancêtre de protéine attaché au complexe, les processus de l'affichage de ribosome saute la perle du Microarray /peptide de /séparation multiple-bien d'ordre qui est commune dans les analyses comportant l'hybridation de nucléotide et fournit une manière prête d'amplifier les protéines qui lient sans déchiffrer l'ordre jusqu'à ce que nécessaire. En même temps, cette méthode se fonde sur produire de grandes, concentrées piscines de diversité d'ordre sans lacunes et maintenir ces ordres de dégrader, d'hybrider, et de réagir les uns avec les autres dans les manières qui créeraient des lacunes du l'ordre-espace.

Les méthodes de concurrence pour le in vitro d'évolution de protéine sont l'affichage bactériophage , l'affichage de levure de , l'affichage bactérien , et l'affichage du ADN messagère.

Citations

Hanes, J. Les Etats-Unis, 1997, 94, 4937-42. Méthodes, 2004, 290, pp 51-67.

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